关键词：
摘要：瞿麦对妊娠小鼠抗生育实验、遗传毒理学实验结果表明：瞿麦10、15、30 g /kg对着床期、早期妊娠，15、30 g/kg对中期妊娠均有较显著的致流产、致死胎的作用，且随剂量增加作用增强，部分胚胎坏死吸收。瞿麦上述剂量无遗传毒性作用。
关键词：瞿麦； 抗生育作用； 遗传毒理学
中图分类号：R285.5
Experimental Study of theEffects of Dianthus Superbus Decoction on Mouse Pregna ncy
Li Xingguang (李兴广), Gao Xuemin (高学敏)
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)
ABSTRACT: The results of theexperiments of antifertility and genetic toxi cology of Dianthus Superbus Decoction (DSD)in pregnant mouse showed that all DSD dose s of 10 g/kg, 15 g/kg and 30 g/kg had a ratherobvious effect of causing abortio n and dead fetus in the nidation period and earlygestational period, and DSD do ses of 15 g/kg and 30 g/kg manifested the same effect inthe intermediate gestat ional period, in a dose-effect manner with partial absorption ofnecrotic embryo . The experiments also showed that all the above DSD doses manifested nogenetic toxicity.
KEY WORDS: Dianthus Superbus; Antifertility; Genetic Toxicology
瞿麦为石竹科植物瞿麦(Dianthus superbus L.)的带花全草。《神农本草经》中记载瞿麦能“破胎堕子，下闭血”。为指导临床用药，为计划生育及优生优育工作提供资料，我们研究了瞿麦对妊娠的影响。
1 材料
1.1 动物： 昆明种性成熟小白鼠，体重(30±2)g，由中国中医研究院实验动物部提供。
1.2 药物： 中药瞿麦(Dianthus superbus L.)购于北京市药材公司并经鉴定。按常规包煎制成1 g/mL的水煎剂，并分别浓缩成3、4.5、9 g/mL。
1.3 试剂： 丝裂霉素C(Mitomycinum C，MMC)，日本公司产品，用于诱发染色体畸变。 秋水仙碱(Colchicinum，Colc)，Fluka进口分装，用于使细胞分裂停止于中期。环磷酰胺 (Cyclo phosphasmidum，CPM)，上海第十二制药厂产品，用于引发细胞微核损伤。小牛血清，浙江金华市清湖犊牛利用研究所出品。低渗液为0.015 mol/L KCl。细胞固定液，用甲醇∶冰醋酸=3∶1配成。细胞染色液为10% Giemsa磷酸缓冲液。
2 实验方法
2.1 抗生育作用的实验方法：将雌鼠与雄鼠按3∶1的比例合笼，每日清晨定时检查雌鼠阴栓，以阴栓出现日为妊娠零天。设瞿麦10、15、30 g/kg3个剂量组和生理盐水阴性对照(1mg/只)组，每组12只 妊娠鼠。在着床期(妊娠第0～4天)灌胃给药，观察有无流产现象。于妊娠第12天处死雌鼠，剖腹检查子宫内胚胎数及其发育状况。在早孕期(妊娠第5～9天)连续灌胃给药，观察有无流产现象，于妊娠第12天剖腹检查子宫内胚胎数及其发育状况。在中孕期(妊娠第10～14天)连续灌胃给药，观察有无流产现象，停药3 d后剖腹检查子宫内胚胎数及其发育状况。在晚孕期(妊娠第15～19天)连续灌胃给药，观察有无早产、仔鼠数及其发育状况。对未分娩者于妊娠第22天处死,检查子宫内胚胎数及其发育状况。
2.2 遗传毒理学实验方法： 将孕鼠分为5组。瞿麦10、15、30 g/kg剂量组，阴性对 照组和阳性对照组，每组6只。胚胎转移微核实验按Matter法，孕鼠骨髓染色体畸变实验按文献[1]方法。
3 实验结果
3.1 瞿麦水煎液对小鼠着床及早、中、晚期妊娠的影响
3.1.1 瞿麦水煎液对小鼠着床期妊娠的影响：瞿麦水煎液各剂量组均可使着床妊娠小鼠流产率明显增加，部分胚胎萎缩退化、坏死、吸收，但各剂量组间无明显差异。死胎率各剂量组均显著高于阴性对照组，且随剂量增加，作用增强。阴性对照组胚胎发育正常，表明瞿麦对妊娠着床期有明显影响。结果见表1、表2。
3.1.2 瞿麦水煎液对小鼠早期妊娠小鼠的影响：瞿麦水煎液各剂量组均可使早期妊娠小鼠流产率明显增加，尤以大、中剂量组更为显著，但各剂量组间无显著差异。部分胚胎萎缩退化或胚胎已坏死吸收，仍可见着床后增粗的子宫。死胎率各剂量组均显著高于阴性对照组，且随剂量的增加而增强。阴性对照组胚胎发育正常。结果表明瞿麦有明显的抗早孕作用。见表3、表4。
表1 瞿麦水煎液对着床妊娠小鼠的致流产作用(n=12)
| 组 别 | 剂量/g/kg | 未流产数/只 | 流产数/只 | 流产率/% |
| 瞿麦小剂量组 | 10 | 8 | 4 | 33.33* |
| 瞿麦中剂量组 | 15 | 7 | 5 | 41.67* |
| 瞿麦大剂量组 | 30 | 7 | 5 | 41.67* |
| 阴性对照组 | 0 | 12 | 0 | 0 |
表2 瞿麦水煎液对着床妊娠小鼠胚胎发育的影响 (n=12)
| 组 别 | 剂量/g/kg | 胎仔数/只 | 活胎数/只 | 死胎/只 | 死胎率/% | |||
| 吸收 | 坏死 | 死亡 | 总数 | |||||
| 瞿麦小剂量组 | 10 | 93 | 93 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 瞿麦中剂量组 | 15 | 79 | 77 | 0 | 1 | 1 | 2 | 2.53* |
| 瞿麦大剂量组 | 30 | 67 | 63 | 3 | 1 | 0 | 4 | 5.97** |
| 阴性对照组 | 0 | 137 | 137 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
表3 瞿麦水煎液对早期妊娠小鼠的致流产作用(n=12)
| 组 别 | 剂量/g/kg | 未流产数/只 | 流产数/只 | 流产率/% |
| 瞿麦小剂量组 | 10 | 8 | 4 | 33.33* |
| 瞿麦中剂量组 | 15 | 5 | 7 | 58.3** |
| 瞿麦大剂量组 | 30 | 4 | 8 | 66.7*** |
| 阴性对照组 | 0 | 12 | 0 | 0 |
3.1.3 瞿麦水煎液对小鼠中期妊娠的影响：瞿麦水煎液对中期妊娠小鼠致流产作用与阴性对照组比较无显著差异。未流产小鼠死胎率，随剂量增加而增高，中、大剂量的死胎率显著高于阴性对照组，表现为宫腔内可见死胎或明显的吸收结节。说明小剂量对胚胎致死作用不明显，大、中剂量可抑制胚胎的发育而致死胎。见表5、表6。
表4 瞿麦水煎液对早期妊娠小鼠胚胎发育的影响(n=12)
| 组 别 | 剂量/g/kg | 胎仔数/只 | 活胎数/只 | 死胎/只 | 死胎率/% | |||
| 吸收 | 坏死 | 死亡 | 总数 | |||||
| 瞿麦小剂量组 | 10 | 83 | 78 | 5 | 0 | 0 | 5 | 6 .02 |
| 瞿麦中剂量组 | 15 | 67 | 62 | 3 | 2 | 0 | 5 | 7.46*** |
| 瞿麦大剂量组 | 30 | 53 | 41 | 9 | 2 | 1 | 1 | 22.60*** |
| 阴性对照组 | 0 | 161 | 161 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
3.1.4 瞿麦水煎液对小鼠晚期妊娠的影响：瞿麦水煎液有一定程度的终止小鼠晚期妊娠作用，使妊娠缩短0.6～3.1 d。各剂量组仔鼠体重均显著低于阴性对照组0.03～0.14g, 但仔鼠发育 未见明显异常。见表7、表8。
表5 瞿麦水煎液对中期妊娠小鼠的致流产作用(n=12)
| 组 别 | 剂量/g/kg | 流产数/只 | 未流产数/只 | 流产率/% |
| 瞿麦小剂量组 | 10 | 0 | 12 | 0 |
| 瞿麦中剂量组 | 15 | 0 | 12 | 0 |
| 瞿麦大剂量组 | 30 | 1 | 11 | 8.33 |
| 阴性对照组 | 0 | 0 | 12 | 0 |
表6 瞿麦水煎液对中期妊娠小鼠发育的影响(n=12)
| 组 别 | 剂量/g/kg | 胎仔数/只 | 活胎数/只 | 死胎/只 | 死胎率/% | ||||
| 吸收 | 坏死 | 死亡 | 总数 | ||||||
| 瞿麦小剂量组 | 10 | 116 | 113 | 3 | 0 | 0 | 3 | 2.6 | |
| 瞿麦中剂量组 | 15 | 139 | 55 | 47 | 9 | 28 | 84 | 60.0*** | |
| 瞿麦大剂量组 | 30 | 93 | 35 | 39 | 2 | 17 | 58 | 62.4*** | |
| 阴性对照组 | 0 | 152 | 152 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
3.2 瞿麦水煎液对胎鼠微核的影响
以PCE微核发生率为检测指标。结果：瞿麦水煎液10、15、30 g/kg组(n=6)微核千分率 (
±s)分别为1.00±0.89、1.33±1.03、1.67±0.753，与阴性对照组(n ＝6)的3.33±2.16比较均无明显差异；而阳性对照组(n=6，0.05g/kg)微核 千分 率为67.67±3.73，显著高于阴性对照组(P<0.01)。结果表明瞿麦无明显的诱发胚胎PCE产 生微核的作用。
表7 瞿麦水煎液对晚期妊娠小鼠天数的影响(±s)
| 组 别 | 剂量/g/kg | 妊娠天数/d |
| 瞿麦小剂量组 | 10 | 20.5±0.80** |
| 瞿麦中剂量组 | 15 | 19.2±0.87** |
| 瞿麦大剂量组 | 30 | 18.0±0.90** |
| 阴性对照组 | 0 | 21.1±0.67 |
表8 瞿麦水煎液对晚期妊娠小鼠发育的影响 (±s )
| 组 别 | 剂量 /g/kg | 胎仔总 数/只 | 仔鼠均重/g | 外观及 内 脏畸形 |
| 瞿麦小剂量组 | 10 | 143 | 1.42±0.01* | (-) |
| 瞿麦中剂量组 | 15 | 138 | 1.38±0.01** | (-) |
| 瞿麦大剂量组 | 30 | 124 | 1.31±0.05*** | (-) |
| 阴性对照组 | 0 | 146 | 1.45±0.01 | (-) |
3.3 瞿麦水煎液对孕鼠染色体畸变的影响
瞿麦水煎液各剂量组对孕鼠染色体畸变率与阴性对照组比较无显著差别(P>0.05)，而阳性对照组则显著高于阴性对照组(P<0.01)。结果表明瞿麦无明显诱发孕鼠骨髓染色体畸变的作用。见表9、表10。
表9 瞿麦水煎液对孕鼠骨髓染色体数目变化的影响
(±s)
| 组 别 | 剂量 /g/kg) | 亚二倍体 发生率/% | 多倍体发 生率/% | 合计/% |
| 瞿麦小剂量组 | 10 | 1.5 | 0.15 | 1.67±1.75** |
| 瞿麦中剂量组 | 15 | 1.5 | 0.33 | 1.83±1.47** |
| 瞿麦大剂量组 | 30 | 1.7 | 0.50 | 2.17±1.47** |
| 阴性对照组 | 0 | 1.50 | 0.50 | 2.00±1.55 |
| 阳性对照组 | 0.4 | 9.1 | 1.10 | 10.33±4.10 |
表10 瞿麦水煎液对孕鼠骨髓染色体结构变化的影响
| 组 别 | 剂量 /g/kg | 平均染色体结构变化率/% | ||||
| 缺失 | 断裂 | 间隙 | 环行 | 合计 | ||
| 瞿麦小剂量组 | 10 | 0.1 | 0.2 | 0 | 0 | 0.3*** |
| 瞿麦中剂量组 | 15 | 0.2 | 0.3 | 0 | 0.1 | 0.6*** |
| 瞿麦大剂量组 | 30 | 0.2 | 0.2 | 0.1 | 0.2 | 0.7*** |
| 阴性对照组 | 0 | 0.1 | 0.2 | 0 | 0.2 | 0.5 |
| 阳性对照组 | 0.4 | 2.1 | 3.5 | 0.7 | 0.9 | 7.2 |
4 讨论
瞿麦水煎液各剂量组对小鼠着床期、早孕期作用明显，而且随剂量增大其作用增强，部分胚胎坏死吸收，尤以对早期妊娠作用更为显著，这与古人对瞿麦能“破胎堕子，下闭血”的认识相一致。瞿麦可使着床、早期妊娠小鼠流产，说明药物致死胎作用是流产的原因之一。机体可以把死胎作为一种异物进行吸收或外排，所以实验中可见死胎大部分已被吸收。
瞿麦水煎液对小鼠中期妊娠无致流产作用，对胎鼠发育各剂量组较对照组随剂量的增大致死胎率增高，而尤以大、中剂量组更为明显，这可能由于中期孕激素较高[2] ，胚胎相对稳固，小剂量作用不明显，而大、中剂量有一定的中期终止妊娠作用。
瞿麦水煎液对小鼠晚期妊娠有明显作用，可使妊娠天数缩短，仔鼠体重减轻。虽然提前分娩，但胎仔均成活，而无明显的致死胎作用。说明对晚孕有催生下胎的作用。
测定胎鼠肝血细胞中的嗜多染红细胞微核发生率及观察孕鼠染色体畸变率是检测细胞遗传损伤、研究药物对胚胎致畸作用的两个有力指标，十分可靠。实验结果表明，瞿麦各剂量组对这两个指标均无明显影响，对胚胎无致畸性，表明无遗传毒性作用。
李兴广，男，41岁，医学硕士，副教授
参 考 文 献
1，吴鹤龄.遗传学实验方法和技术.北京：高等教育出版社，1984. 167～222
2，俞霭峰.妇产科内分泌学.上海: 上海科学技术出版社，1985.69
(收稿日期：2000-05-30 ) , 百拇医药